API
Sistemas de identificación multipruebas (API 20 E)

Galeria API 20E

(Sistemas de identificación multipruebas)

 

La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram -. Básicamente consta de 21 tests bioquímicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. La prueba número 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira.
 


Las pruebas de que consta la galeria son las siguientes:

 

Prueba

Reacción / Enzimas

ONPG

Beta-galactosidasa

ADH

Arginina deshidrolasa

LDC

Lisina descarboxilasa

ODC

Ornitina descarboxilasa

CIT

Utilización del citrato

H2S

Producción de H 2 S

URE

Ureasa

TDA

Triptófano desaminasa

IND

Producción de indol

VP

Producción de acetoína (Voges-Proskauer)

GEL

Gelatinasa

GLU

Fermentación/oxidación de glucosa

MAN

Fermentación/oxidación de manitol

INO

Fermentación/oxidación de inositol

SOR

Fermentación/oxidación de sorbitol

RHA

Fermentación/oxidación de ramnosa

SAC

Fermentación/oxidación de sacarosa

MEL

Fermentación/oxidación de melobiosa

AMY

Fermentación/oxidación de amigdalina

ARA

Fermentación/oxidación de arabinosa

OX

Citocromo oxidasa

 

A patir de una colonia bien aislada del microorganismo, hacer una suspensión en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estéril.

 

 

Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula (cada pocillo tiene un tubo y una cúpula, parte aerobia), de todos los pocillos.

 

Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.

 

 

Cubrir con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.

 

 

Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua en los alvéolos de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación.

 

 

Incubar a 37 °C durante 18-24 h.

 

 

Tras la incubación se anotan los resultados inmediatos, es decir, los que no requieren ser revelados.

 

Determinadas pruebas requieren ser reveladas, para el revelado se tienen que tener en cuenta dos criterios:

 

  • Si la glucosa da negativo y los tests positivos son dos o menos de dos, no hay que añadir reactivos. Cuando ésto ocurre se hacen otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver determinados metabolismos especiales.

 

  • Si la glucosa es positiva y/o tres o más tests son positivos se revelan los test que requieren reactivos:

TDA

 

Añadir una gota de FeCl3 10 %.

 

VP

 

Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH).

 

IND

 

Añadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino-cinamaldehido.

 

Oxidasa

 

Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado.

Interpretación

 

La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura, y anotando el resultado como positivo o negativo (más adelante se explicará con detalle).

 

Prueba

Reacción / Enzimas

Negativo

Positivo

ONPG

Beta-galactosidasa

sin color

amarillo

ADH

Arginina deshidrolasa

amarillo

rojo o naranja

LDC

Lisina descarboxilasa

amarillo

rojo o naranja

ODC

Ornitina descarboxilasa

amarillo

rojo o naranja

CIT

Utilización del citrato

verde

azul oscuro o turquesa

H2S

Producción de H 2 S

sin precipitado negro

precipitado negro

URE

Ureasa

amarillo

rojo o naranja

TDA

Triptófano desaminasa

amarillo

marrón-rojo

IND

Producción de indol

amarillo

color rosa o anillo rosa-rojo

VP

Producción de acetoína (Voges-Proskauer)

sin color

rosa-rojo

GEL

Gelatinasa

sin difusión

difusión de pigmento

GLU

Fermentación/oxidación de glucosa

azul o verde

amarillo

MAN

Fermentación/oxidación de manitol

azul o verde

amarillo

INO

Fermentación/oxidación de inositol

azul o verde

amarillo

SOR

Fermentación/oxidación de sorbitol

azul o verde

amarillo

RHA

Fermentación/oxidación de ramnosa

azul o verde

amarillo

SAC

Fermentación/oxidación de sacarosa

azul o verde

amarillo

MEL

Fermentación/oxidación de melobiosa

azul o verde

amarillo

AMY

Fermentación/oxidación de amigdalina

azul o verde

amarillo

ARA

Fermentación/oxidación de arabinosa

azul o verde

amarillo

OX

Citocromo oxidasa

 

 

Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. Los pocillos están separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de la oxidasa).

 

Para obtener el perfil númerico de 7 cifras, a cada pocillo se le dará el valor 0, 1, 2 ó 4, de acuerdo a los siguientes criterios:

 

  • Si la reacción es negativa se pone 0.

 

  • Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero.

 

  • Se suman los valores de cada triplete, con las sumas de los siete tripletes se obtiene un código de 7 cifras.

Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata, para realizar esta operación hay programas informáticos.

Perfiles numéricos.

 

 

0104140

Shigella flexneri

0104452

Salmonella paratyphi A

0104504

Pasteurella multocida

0104521

Yersinia enterocolitica

0140004

Pasteurella multocida

0144042

Shigella boydii

0206042

Acinetobacter calcoaceticus

0210004

Achromobacter sp.

0210004

Alcaligenes faecalis

0210004

Alcaligenes sp.

0314000

Proteus mirabilis

0504512

Salmonella paratyphi A

0676001

Proteus vulgaris

0776000

Proteus mirabilis

1000004

Pasteurella sp.

1014743

Klebsiella ozaenae

1104112

Shigella sonnei

1214012

Yersinia pseudotuberculosis

1214773

Klebsiella pneumoniae

2206004

Pseudomonas aeruginosa

2504752

Salmonella spp.

3005573

Enterobacter cloacae

3246527

Aeromonas hydrophilia

4004550

Salmonella cholerasuis

4004550

Salmonella typhi

4104100

Salmonella gallinarun

4357106

Vibrio parahemolyticus

4404112

Salmonella gallinarum

4404510

Salmonella cholerasuis

4404540

Salmonella tiphy

4504010

Salmonella pullorum

4604552

Salmonella spp.

4704500

Salmonella cholerasuis

5004024

Pseudomonas cepacea

5044124

Vibrio cholerae

5046753

Serratia odorifera

5100100

Yersinia ruckeri

5104111

Hafnia alvei

5104542

Salmonella arizonae

5144572

Escherichia coli

5207323

Serratia rubidae

5255573

Klebsiella oxytoca

5346761

Serratia marcescens

5314173

Enterobacter gergoviae

5317761

Serratia marcescens

5704412

Salmonella arizonae

5704552

Salmonella arizonae

6004540

Salmonella typhi

6144204

Plesiomonas shigelloides

6404112

Salmonella spp.

6504750

Salmonella spp.

6604512

Salmonella spp.

6704342

Salmonella spp.

6704532

Salmonella spp

6704752

Salmonella gallinarum

7244126

Aeromonas hydrophila

7305773

Enterobacter cloacae

7704752

Salmonella arizonae

7704752

Salmonella spp.

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