COMPONENTES
DE UN CITOMETRO
Básicamente
un citómetro está compuesto por:
a) Sistemas de fluidos:
- Inyección de la muestra.
- Cámara de flujo.
b) Sistemas ópticos:
- Fuentes de luz.
- Detectores.
c) Sistemas electrónicos y computadora:
- Amplificador-convertidor.
- Sistema informatico.
SISTEMAS
OPTICOS
El sistema óptico origina (sistema de iluminación) y
recoge (detectores) los impulsos luminosos de acuerdo con las señales de
dispersión y fluorescencia. Consta en primer lugar de una fuente de
iluminación excitante y en segundo lugar detectores que se encargan de
recoger las señales de luz emitida. La fuente luminosa es uno o dos láseres
concentrados dentro de una elipse que se dirige hacia la muestra gracias a
unas lentes. El punto en el que el láser y las células chocan debe ser
siempre constante. Los detectores son de 2 tipos, fotomultiplicadores para
detección de señales SSC y fotodetectores para la detección de señales FSC.
SISTEMAS
ELECTRONICOS
El sistema electrónico convierte todo en señales digitales
para almacenar en el ordenador
EL
CITOMETRO
El citómetro es un
aparato capaz de medir varios parámetros celulares a partir de una suspensión
celular por medio la interacción de las células con
un haz de luz láser guiadas mediante un flujo contínuo.
SISTEMAS
DE FLUIDOS
El sistema de fluidos transporta las células hacia el
centro del láser de una en una. En la cámara de flujo de un citómetro se
produce un flujo laminar al interaccionar dos fluidos, el de la muestra y el
de la vaina o envolvente (PBS), que rodea el fluido que contienen la muestra.
Cuando se produce esta interacción, las células penetran en el centro de
fluido de la vaina por medio de diferentes presiones velocidades de fluidos
(constante pero mayor que la de la muestra). El PBS y la muestra no se
mezclan. Por aumento de la presión en el deposito
del PBS se establece un flujo hacia abajo y las células salen por el tubo que
conecta con la muestra, al principio apelotonadas y desordenadas, pero
después se alinean hasta quedar en fila de modo que pasen de una en una ante
el rayo láser. El que las células pasen alineadas por el láser es esencial
para que nos definan bien las poblaciones situándolas en su sitio. En el caso
contrario en la pantalla veremos que las células se colocan como si se
tratase de un televisor sin antena. Esto puede ocurrir por que el tubo este
rajado o roto impidiendo el mantenimiento de la presión, por falta de PBS o
debido a la existencia de burbujas en la cámara.
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