TEST DE GESTACIÓN

Un buen número de mujeres acuden al médico general y al especialista no para someterse a tratamiento, sino para averiguar si está o no embarazadas. El diagnóstico precoz cierto del embarazo presenta un gran interés humano y muchos problemas técnicos.

El síntoma seguro del embarazo es la percepción por la madre de los primeros movimientos fetales. Este es un síntoma tardío que aparece al cuarto mes y medio del embarazo tan tardíos como ciertos son la apreciación de tonos cardíacos fetales, movimientos activos del feto y signos radiológicos. 

De lo expuesto se deduce el gran interés, demostrado siempre por la Medicina, para llegar a un diagnostico precoz y seguro del embarazo en sus comienzos.

En la actualidad, para solventar este problema acudimos a las exploraciones auxiliares del diagnóstico a través del laboratorio, que nos proporcionan signos objetivos para el diagnóstico precoz del embarazo.

ANURO – REACCIÓN DE GALLI – MAININI.

Material.

·        3 vasos de precipitados de 500 ml.

·        1 vaso de precipitados de 50 ml.

·        4 pipetas de punta fina.

·        1 matraz aforado de 100 ml con tapón.

·        6 portas y cubres.

·        1 microscopio.

·        Jeringuilla de 3 ml con aguja fina y corta.

·        Reactivo: 3 ranas macho de la especie esculenta o viridis.

Fundamento.

El contenido de gonadrotropina coriónica en la orina de embarazada está en íntima conexión con el ciclo de la gestante. La excreción sigue una curva típica. La producción se inicia poco después de la fecundación y sigue un ritmo ascendente con un valor máximo hacia los tres meses del embarazo para descender luego gradualmente hasta el parto.

Por otro lado la rana esculenta tiene un ciclo tiene un ciclo espermatogénico continuo con tres máximas en los meses de febrero junio y noviembre, y con ondas menores intermedias.

Si se inyecta a la rana orina de embarazada, la gonadotropina coriónica provoca la eyaculación de espermatozoides en el animal, y tomando una muestra de orina de la cloaca del mismo, se pueden observar al microscopio los espermatozoides.

Nota importante: a la paciente se le debe prohibir tomar medicamentos y comidas picantes, por lo menos 24 horas antes de la toma de muestra. 

Técnica.

1.                                                 Preparación de la orina: se tomará de orina de la primera micción de la mañana por ser más concentrada. Para hacerla aún más concentrada, se procede a ello por el método de espumación, que consiste, el más simple, en verter en una orina hasta casi el cuello del matraz. Se tapa y agita fuertemente, se deja en posición vertical para que la espuma se reúna en la parte superior y se retira ésta por medio de una pipeta con tetina de goma o cuentagotas y se vierte la espuma en un vasito. En enriquecimiento óptimo se consigue cuando se recoge por espumado el 8% de volumen del líquido primitivo.

2.                                                 Preparación del reactivo biológico: las ranas deben se machos de la especie esculenta o viridis bien desarrolladas sexualmente y de peso comprendido entre 15 y 30 gramos. se emplean tres ranas para cada determinación.Pueden mantenerse en recipientes tapados con tela metálica y con sólo 1,5 centímetros de altura del agua, y zona un poco más elevada donde puedan estar en seco. Se guardan en sitios frescos y oscuros. Así pueden mantenerse varios meses sin necesidad de alimentarlas. Incluso pueden volver a utilizarse a los 15 días, pero es mejor utilizar para cada determinación nuevos animales, pues puede ocurrir que las ranas que han sido utilizadas varias veces emitan espermatozoides por acto reflejo, al inyectarle la orina problema, lo cual nos daría falsas positividades. Por otra parte, Bedoya ha demostrado la producción de antigonadotropinas en estos animales. La temperatura óptima en el momento de la prueba debe ser entre 25 y 30 º C

            Técnica:

1.      Filtrar la orina por papel.

2.      Concentración de la orina por espumación.

3.      Comprobación de la madurez sexual de la rana.

4.      Comprobación de la negatividad de la rana: para ello se toma de la cloaca del animal una gota de orina y se mira al microscopio. No deben aparecer espermatozoides. En caso de duda, se desecha el animal.

5.      Pesar al animal.

6.      La prueba se hará por triplicado, inyectando la orina a través de la capa muscular del músculo sartorio y en el saco dorsal 1 ml de orina por cada  10 gr de peso del animal.

7.      Dejar reposar la rana por separado, durante una hora, puestas en vasos de precipitado secos.

8.      A la hora se le extrae de la cloaca líquido y se observa al microscopio sobre un porta. 

En caso negativo se repite la lectura a las dos y a las tres horas. Si en esta última lectura no aparecen espermatozoides se da por negativa la orina.

La reacción es positiva cuando aparecen espermatozoides típicos de aspecto bacilar, en los que en ocasiones se pueden observar la cola; se encuentran aislados o en forma de rosetones con las cabezas juntas y las colas hacia fuera.

La exactitud del método es del 99,5% sobre 1000 casos.

Las determinaciones deben hacerse lo más rápidamente posible después de la obtención de la muestra, de lo contrario la orina fermentan y se producen sustancias tóxicas que pueden matar a los animales. 

TEST DE EMBARAZO EN UN SOLO PASO (Clip test hCG).

Este test se realiza para la valoración de la hormona hCG e indicado para el diagnóstico de embarazo.

El Clip hCG es un test rápido para el análisis cualitativo en un solo paso, para la detección de la hormona gonadotropina coriónica humana en suero y orina.

El método emplea una combinación única de conjugado de anticuerpos monoclonales – colorantes y anticuerpos policlonales fijados en fase sólida.

Esto permite la identificación selectiva de la beta hCG en las muestras problema con un elevado grado de sensibilidad en sólo 5 minutos puede detectarse niveles de la hCG de tan sólo 25 mUI/ml.

A medida que la muestra problema fluya a través del dispositivo absorbente el conjugado de anticuerpos – colorantes se une a la beta hCG formando un inmunocomplejo antígeno – anticuerpo. Este complejo se une al anticuerpo anti – alfa hCG que está en la zona de reacción.

Aparece una banda de color rosa cuando la concentración de hCG de la muestra es superior a 25mUI/ml. La mezcla de reacción continúa fluyendo a través del dispositivo absorbente pasando de la zona de reacción a la zona de control. El conjugado no unido en la zona de reacción, se une a los reactivos en la zona de control produciendo una banda de color rosa, demostrando que la prueba está funcionando correctamente.

En ausencia de hCG no aparece ninguna banda coloreada en la zona de reacción y si en la zona de control.

Muestra:

-                                 Suero.

-                                 Orina.

Técnica:

1.      Antes de realizar el análisis, atemperar la muestra y el clip test hCG.

2.      Retirar  el casete de la envoltura protectora.

3.      Rotular el casete con el nombre y el número del paciente.

4.      Con la pipeta de plástico dispensar 8 gotas de la muestra (250microlitros), sin burbujas de aire en el pocillo de dispensación del casete.

5.      Transcurridos 5 – 10 minutos, leer el resultado. No interpretar los resultados transcurrido 10 minutos.

6.      En el caso de que se sospeche una baja concentración de hCG en la muestra, se aconseja esperar 10 minutos antes de leer los resultados de la reacción.

7.      Debido a la viscosidad de algunas muestras, esta puede llegar antes a la zona de control indicando la finalización de la prueba. Dejar transcurrir 10 minutos antes de confirmar un negativo. 

                                 NEGATIVO                           POSITIVO

Interpretación:

·        Negativo: aparece una banda coloreada en la zona control y ninguna en la zona de prueba o reacción.

·        Positivo: además de la banda en la zona de control, aparece otra banda claramente diferenciable en la zona de prueba o reacción.

·        No válido: cuando no se observa una banda de color en la zona de control, la prueba no puede interpretarse. En este caso, se recomienda repetir el test con otro casete u obtener 48 horas más tarde una nueva muestra, para repetir el ensayo.

            Precauciones:

1.      Esta prueba está destinada exclusivamente para utilizarse en el diagnóstico in vitro.

2.      Leer atentamente las instrucciones antes de realizar la prueba.

3.      No utilizar después de la fecha de caducidad que aparece indicada en la etiqueta del envase.